车辆工程就业前景-家长会主持人开场白

细胞凝集反应实验报告

山东大学实验报告 2015年 4 月 16日
姓名 班级 13级生命基地班 学号 同组者:
科目 细胞生物学实验 实验题目 细胞凝集反应
【实验题目】
细胞凝集反应
【实验目的】
1、了解细胞的表面结构。
2、掌握细胞凝集的原理。
3、掌握细胞凝集实验的操作方法。
【实验材料与用品】
1. 试剂:PBS缓冲溶液、0.9%的氯化钠溶液(生理盐水)
2. 器具:酒精棉球、双凹片、载玻片、普通光学显微镜、托盘天平、滴管、离
心管
3. 材料:兔子静脉血
【实验原理】
1. 凝集素
凝集素(lectin)是 一类含糖的(少数例外)并能与糖专一结合的蛋白质，它具有
凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。目前已发 现近千种植物中含有凝集素，在各种真

菌、无脊椎动物、脊椎动物、人体的各种组织和器 官中及某些病毒体内也含有凝集
素。常用的为植物凝集素，通常以其被提取的植物命名，凝集素为它们的 总称。
在细胞表面，组成细胞膜的糖脂和糖蛋白伸出寡糖链，形成细胞外被(糖萼)。
凝集 素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结
果，加入与凝集素互补的糖可 以抑制细胞的凝集。
2. 细胞凝集
细胞凝集是指细胞彼此聚集在一起，成为一簇不规 则的细胞团，目前认为，细
胞间的联系、细胞的生长和分化、肿瘤的发生与免疫反应都与细胞表面的分枝 状糖
分子有关。 3. 细胞凝集的反应技术
第 1 页 共 6 页 细胞生物学实验报告

山东大学实验报告 2015年 4 月 16日
姓名 班级 13级生命基地班 学号 同组者:
科目 细胞生物学实验 实验题目 细胞凝集反应
(1)直接凝集反应技术
颗粒性抗原与相应的抗体血清混合后，在电解质的参与下，经过一 定时间，抗
原抗体凝集成肉眼可见的凝集块，这种现象称为凝集反应。血清中的抗体称为凝集
素 。抗原称为凝集原。细菌或其他凝集原都带有相同的电荷(阴电荷)，在悬液中相
互排斥而呈均匀的分散 状态。抗原和抗体相遇后，由于抗原和抗体分子表面存在相
互对应的化学基团，因而发生特异性结合，称 为抗原抗体复合物，由于抗体与抗原
结合，降低了抗原分子间的排斥力，抗原表面的亲水基团减少，此时 已有凝集趋

势，在电解质参与下，中和了抗原抗体复合物的大部分电荷，使之失去了经典 排斥
力，分子间相互吸引，凝集成较大颗粒。出现了肉眼可见的凝集反应。
2)间接凝集反应技术 (
可溶性抗原(或抗体)吸附于免疫学反应无关的颗粒表面上，当这 些致敏的颗粒
与相应的抗体(或抗原)相遇时，就会产生特异性的结合，在电解质的参与下，这些
颗粒就会发生凝集现象。这种借助于载体的抗原抗体凝集现象就叫做间接凝集反应
技术。 4. 载体
具有吸附抗原(抗体)的载体很多，如聚苯乙烯乳胶、白陶土、活性炭、人和多
种动物的红血球 、某些细菌等。
良好的载体有以下几点基本要求:
(1)在生理盐水或缓冲液中无自凝现象;
(2)大小均匀;
(3)比重与介质相似，短时间内不沉淀;
(4)无化学或血清学活性;
(5)吸附抗原(或抗体)后，不影响其活性;
目前使用最广泛的是人的O型红血球和绵羊红血球。后者使用更广，因其来源
方便，另
外绵羊红血球的表面有大量的糖蛋白受体，极易吸附某些抗原物质，吸附性能
好，且大
小均匀一致。
第 2 页 共 6 页 细胞生物学实验报告

山东大学实验报告 2015年 4 月 16日
姓名 班级 13级生命基地班 学号 同组者:
科目 细胞生物学实验 实验题目 细胞凝集反应

【实验步骤】
一、大体流程
取兔子静脉PBS+红细胞悬土豆凝集素+红血配置1,液 混合(对照) 细胞悬液
混合 红细胞悬液
摇晃5-10min 显微镜下观察 观察
二、具体操作
1、称取土豆去皮块茎2g，加10mlPBS缓冲液，浸泡24小时，浸出 的粗提液中
即含有可溶性
土豆凝集素。(老师已做好)
2、抽取兔子静脉血液 (加抗凝剂)1ml，加生理盐水3ml，在1000rmin条件
下，离心5min，

第 3 页 共 6 页 细胞生物学实验报告

山东大学实验报告 2015年 4 月 16日
姓名 班级 13级生命基地班 学号 同组者:
科目 细胞生物学实验 实验题目 细胞凝集反应
重复3次离心，最后按压积红细胞体积用生理盐水配成1%红细胞悬液。 3、分
别用滴管吸取土豆凝集素和1%红细胞悬液各一滴，置双凹片左孔内，充分混匀。
4、 同时分别用滴管吸取PBS缓冲液和1%的红细胞悬液各一滴，置双凹片右孔内，
充分混匀，做对照实验 。
5、摇晃5—10min后，观察有无发生细胞凝集并置显微镜下观察。
【实验结果与分析】
I.如图1、图2所示:刚开始计时时，两侧溶液均无凝集现象;4m in左右时，可
看到双凹片左侧溶液中出现凝集现象，一部分血细胞在中央聚集呈沙粒状，溶液周
围较澄清;而右侧溶液无凝集现象。说明土豆凝集素可以使血液发生凝集，而PBS
缓冲液则不能。

图1: 刚开始时双凹片两侧溶液对比图 图2:4min时双凹片两侧溶液对比图 II.
如图3、图4所示:在10×10显微镜下观察，可看 到左侧溶液中血细胞聚集，凝结
成块状，而右侧溶液中血细胞分散均匀，呈透明状。

图3: (10×10)显微镜下观察图(左侧) 图4:(10×10)显微镜下观察图(右侧)
第 4 页 共 6 页 细胞生物学实验报告

山东大学实验报告 2015年 4 月 16日
姓名 班级 13级生命基地班 学号 同组者:

科目 细胞生物学实验 实验题目 细胞凝集反应
III. 在高倍镜下观察如图5所示，可较清楚的看到血细胞聚集在一起，还可
看到少数未发生凝集的血细胞;

高倍镜下(10×40)，
观察到的凝集现象
由以上的观察可知:细 胞凝集的时间较快，4min左右就可以发生明显凝集现象;
细胞凝集的时间也受到土豆凝集素的浓度， 以及血细胞的浓度影响，一般来说，凝
集素的浓度越高，血细胞的浓度越高，细胞凝集的时间也会越短， 凝集现象也越明
显，但在本次实验中未进行不同浓度对凝集时间的影响的实验; 从空白对照还可以看出，细胞发生凝集时凝集素必不可少的，没有细胞凝集素，细胞几乎不发生凝
集。
实验反思:
第一次滴加完溶液后，在晃动双凹片的过程中因操作不熟练，使两个孔中的液< br>体混到了一起，因此重新滴加了一次;在使用双凹片时要注意摇动的技巧，不可前
后或左右单一地 摇动，应该一手固定，一手成环形方向摇动，使凹槽内的液体转动
起来，同时注意滴加的液体不宜过多， 若加多了可用吸水纸吸掉部分多余液体，避
免两个凹槽内的液体相互接触; 【注意事项】
1. 实验前确定好双凹片的反正面，做好适当标记

2. 注意控制加入双凹片孔中的液体的量，以免使双凹片的2个孔中的液体混
合; 3. 摇晃双凹片时要注意摇动的技巧，不可前后或左右单一地摇动，应该一手
固定，一手成
环形方向摇动，使凹槽内的液体转动起来;
4. 显微镜下观察时，注意淀粉球和细胞的区分;淀粉球呈白色球状，略大于细
胞;
第 5 页 共 6 页 细胞生物学实验报告

山东大学实验报告 2015年 4 月 16日
姓名 班级 13级生命基地班 学号 同组者:
科目 细胞生物学实验 实验题目 细胞凝集反应
5. 实验过程中若凹槽内的水分蒸发过多，应及时补充PBS缓冲液，以免观察
不到实验现象; 6. 换用高倍镜下观察时，注意避免污染镜头，若液体过多，应用
吸水纸吸取部分液体在进
行高倍镜下的观察;
第 6 页 共 6 页 细胞生物学实验报告