香港租房-七年级上册语文试卷

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免疫学检测

抗原抗体反应(antigen-antibody reaction)是指抗原与相应抗体所发生的特异
性结合反应。
抗原抗体反应的特点
（一）特异性 抗原抗体的结合本质是抗原决定簇与抗体超变区的结合。抗原决
定簇与抗体超变 区在一级结构和空间构型上呈互补关系，所以它们的结合具有高
度特异性。抗原抗体结合力的大小，常用 亲和力（affinity）或亲合力（avidity）
来表示，前者指抗体分子上一个抗原结合部位 与相应的抗原决定基之间的结合强
度，后者指一个抗体分子与整个抗原之间的结合强度。抗原与抗体的结 合为非共
价的可逆结合，它们空间构象的互补程度不同，结合力强弱也不同，互补程度越
高，亲 和力越高。
（二）可逆性 抗原抗体结合反应不是化学反应，而是非共价键的结合。4
种分子间引力参与了抗原抗体间的结合，分别是静电引力、范德华力、氢键结合
力和疏水作用。抗体和 抗原之间的亲和力源自抗体超变区和抗原决定簇在空间构
型上的互补性。抗原和抗体分子均是极性分子， 反应温度、酸碱度和离子浓度对
它们的极性有重要影响，从而影响着两者的空间构型和亲和力。抗原抗体 结合反
应是可逆反应。正向反应产物是抗原抗体复合物，复合物解离则是逆向反应。
（三）抗原和抗体的浓度及合适比例
抗原和抗体的浓度及合适比例是可见现象能否出现的关键 。当比例不合适
时，少量的小分子抗原抗体复合物停留在反应的第一阶段，不能进一步交联和聚
集，故不出现肉眼可见的现象。一般用电解质溶液来调整抗原和抗体的浓度，使
两者的比例合适。
（四）抗原抗体反应的阶段性
抗原抗体反应的过程可分为两个阶段。第一阶段是抗原抗体发生 特异性结
合，此阶段的抗原抗体复合物量很少，分子小，肉眼看不见。当抗原抗体比例合
适并且 具备一定的环境因素(如电解质、pH、温度、补体)时，抗原抗体复合物进
一步交联和聚集，反应也进 入第二阶段，即可见反应阶段。第二阶段的抗原抗体

1

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复合物可以出现凝集、沉淀等肉眼可见的现象，还可激活补体，引发溶菌、溶血
等现象。
影响抗原抗体反应的主要因素
（1）电解质
抗原与抗体发生特异性结合后，若没有 电解质参加，也不出现可见反应。为
了促使沉淀物或凝集物的形成，体外抗原抗体反应一般在生理盐水或 缓冲液中进
行。
（2）酸碱度
抗原或抗体都是具有一定等电点的极性物质，pH 过高或过低都将影响它们
的理化性质。因此，抗原抗体反应一般在pH为6～8环境中进行。当pH接近 颗
粒性抗原的等电点时，即使无相应抗体存在，颗粒性抗原也会发生非特异性凝集，
出现假阳性 反应。
（3）温度
在一定范围内，温度升高可加速分子运动，抗原与抗体碰撞机会增多，反 应
得以加速。但若温度高于56℃，已结合的抗原抗体反而重新解离，甚至变性或
破坏。为模拟 体内的真实状况，抗原抗体反应温度一般定为37℃。每种试验都
有自己的最适反应温度，有些实验必须 在最适反应温度下进行。例如冷凝集素与
红细胞的结合需要在4℃左右进行，因为温度超过20℃时结合 发生解离。
抗原抗体反应的4种基本类型
（一）凝集反应(agglutination)
颗粒性抗原（细胞、细菌等）或吸附于免疫无关载体上的可溶性抗原，与相
应抗体结合后，在适 量电解质的存在下，形成肉眼可见的凝集团块，此为凝集反
应。凝集反应既可测定抗原，也可测定抗体， 方法简便、敏感，适用于各种颗粒
性抗原、可溶性抗原和抗体的检测，且敏感度高于沉淀反应。
1、直接凝集反应 (direct agglutination)
直接凝集是指细菌或红 细胞（又叫凝集原）与相应抗体直接结合所产生的凝
集现象，例如诊断伤寒、副伤寒病的肥达氏反应(W idal reaction)，用于血型鉴
定的血细胞凝集试验。
2、间接凝集反应 (indirect agglutination)

2

3
间接凝集是指可溶性抗原吸附在乳胶颗粒或红细胞等载体表面后（这个过程
叫包被，又叫载体致 敏），再与相应抗体结合，在适宜电解质存在的条件下，出
现凝集现象。例如用γ球蛋白包被的乳胶颗粒 检测病人血清中的类风湿因子，用
抗真菌抗体包被的胶乳颗粒快速检测脑脊液中的真菌。在间接凝集反应 中，常用
的载体有动物或人的O型红细胞，细菌，多种惰性颗粒如聚苯乙烯胶乳颗粒、明
胶颗粒 、活性炭颗粒等。用红细胞做载体称为间接血凝试验，用聚苯乙烯胶乳颗
粒做载体称为胶乳凝集试验。根 据包被载体的物质不同，间接凝集试验分为2
类。一类是用抗原包被载体以检测抗体，叫正向间接凝集。 另一类是用抗体包被
载体以检测抗原，叫反向间接凝集。
（1）间接血凝试验 以红细 胞为载体的间接凝集试验。最常用的为绵羊、家
兔、鸡的红细胞及O型人红细胞。新鲜红细胞能吸附多糖 类抗原，但吸附蛋白质
抗原或抗体的能力较差。新鲜红细胞经甲醛、戊二醛、丙酮醛等物质醛化后，对< br>蛋白质抗原或抗体的吸附能力增强，并且可长期保存而不溶血。醛化红细胞血凝
反应的效果与新鲜 红细胞相似。
（2）胶乳凝集试验 以聚苯乙烯胶乳颗粒作为载体的间接凝集试验叫胶乳凝集试验。聚苯乙烯胶乳颗粒带负电荷，对蛋白质分子有弱吸附能力。现在常用的
载体是带有化学活性 基团的聚苯乙烯胶乳颗粒，例如羧化聚苯乙烯胶乳等。在碳
化二亚胺等交联剂的作用下，抗原或抗体上的 氨基与胶乳上的羧基发生缩合反
应，抗原或抗体被连接到胶乳颗粒表面。
（3）协同凝集试验(co-agglutination) 金黄色葡萄球菌的细胞壁中有一种
蛋白质，叫SPA(staphylococcus protein A)，它能与IgG的Fc段结合。利用
这个特性可以将IgG类抗体与葡萄球菌连接。连接有IgG类 抗体的葡萄球菌能与
相应抗原发生凝集反应，这种反向间接凝集试验叫协同凝集试验。
（4）间接凝集抑制试验 以正向间接凝集抑制试验为例（图14-1）：将标本
先与已 知抗体试剂反应，再加入已知抗原包被的载体。若标本中不存在相同抗原，
则已知抗体试剂未被结合， 可继续与载体上的已知抗原结合而出现凝集；如标本
中存在相同抗原，则凝集反应被抑制。同理，可用已 知抗原和已知抗体包被的载
体来检测标本中的抗体，此时称反向间接凝集抑制试验。
（5）抗球蛋白试验 (antiglobulin test, Coombs test) IgG类抗体能与

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相应的颗粒性抗原牢固结合， 但由于它只有两个结合价，分子又较小，故这种结
合反应不出现凝集现象。因此IgG类抗体被称为不完 全抗体。加入抗球蛋白抗体
（第二抗体）后，它能够同红细胞表面的IgG抗体结合，使红细胞发生凝集 。这
种通过抗球蛋白抗体的搭桥作用使红细胞凝集的试验叫抗球蛋白试验，又叫桥梁
凝集试验。 它是由Coombs于1945年建立的，故称为Coombs试验。该实验可以
检测不完全抗体，广泛 用于血液病及输血产生的抗体检测。依据方法的不同又分
为两种。①直接Coombs试验：用于检测红 细胞上的不完全抗体。它将抗人球蛋
白抗体加入致敏红细胞（表面已结合有不完全抗体）悬液中，与红细 胞表面的不
完全抗体结合，使红细胞发生凝集。常用于新生儿溶血症、自身免疫性溶血症、
特发 性自身免疫性贫血等疾病检测。②间接Coombs试验：用以检测血清中游离
的不完全抗体。方法是用 红细胞预先吸收待检血清中的不完全抗体，再加入抗球
蛋白抗体，红细胞就发生凝集。间接Coombs 试验多用于检测红细胞Rh血型系统
的抗D抗体。抗D抗体是Rh+红细胞的D抗原刺激机体后产生的I gG类抗体（不
完全抗体），它可以同Rh+红细胞结合但不发生凝集。用Rh+红细胞预先吸收母体< br>血清中的抗D抗体，再加入抗IgG的抗体（抗球蛋白抗体），红细胞就发生凝集。
（二）沉淀反应(precipitation reaction)
可溶性抗原 与抗体结合，当两者比例合适时，在一定的介质中可出现不透明
的沉淀物（即较大的不溶性免疫复合物） 。这种抗原抗体反应叫沉淀反应。沉淀
反应所用的介质主要有电解质和凝胶两种。经典的沉淀反应是利用 第二阶段出现
的沉淀线或沉淀环等来判定结果，称为终点法；而免疫浊度法则是依据第一阶段
免 疫复合物的形成速率来判定结果，称为速率法。
凝胶内的沉淀反应
（1）单向琼脂扩散试验(single agar diffusion) 是在含有抗体的 琼脂板
上打孔，将抗原加入小孔内，经一段时间的扩散后，在比例合适处抗原与抗体形
成肉眼可 见的以小孔为中心的白色沉淀环，环的直径与加入的抗原浓度成正相
关，再与已知浓度抗原制作的标准曲 线相比较即可求出未知抗原的量。本方法常
用于定量测定IgG、IgM、IgA和C3等。
（2）双向琼脂扩散试验(double agar diffusion) 方法是在琼脂板上 间隔一
定距离打孔，再在相邻的两孔分别加入抗原和抗体，它们各自向四周凝胶中扩散，

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一段时间后在两孔间比例合适处形成白色沉淀线。根据沉淀 线的数量、位置、形
态等可以对抗原或抗体做定性或半定量分析（图14-2），还可分析两种抗原性质
上的异同（图14-3）。
3、免疫电泳技术
免疫电泳技术是电泳技术与沉淀反应 的结合产物。它有两大优点，一是加快
了沉淀反应的速度，二是可利用电泳技术先分离蛋白质各组分，再 分别与抗体反
应，由此可对复杂蛋白质进行分析。免疫电泳技术的种类很多如火箭电泳（rocket
electrophoresis），对流免疫电泳(counter immunoelectrophoresis) ，免疫
电泳(immunoelectrophoresis) ，免疫印迹法 (immunoblotting)
（三）补体结合试验(complement fixation test，CFT)
抗原抗体反应的产物是免疫复合物，它可以固定游离的补体 ，使补体失去溶
解致敏红细胞的能力。补体结合试验依据此特点，应用致敏红细胞做指示系统，
来判断反应系统是否发生了抗原抗体反应。该试验有5种成分参与，分属于3
个系统：①反应系统，即已 知的抗原(或抗体)与待测的抗体(或抗原)；②补体系
统；③指示系统，即表面结合了溶血素的绵羊红 细胞。如果反应系统中存在待测
的抗体(或抗原)，则抗原抗体发生结合后可固定补体；再加入指示系统 时，由于
反应液中已没有游离的补体而不出现溶血现象，此为补体结合试验阳性。反之，
为阴性 。补体结合试验早先多用于病原体检测、肿瘤相关抗原鉴定以及自身抗体
检测等，但由于参与反应的成分 多，影响因素复杂，重复性差，现已逐渐被其它
方法取代。
（四）中和反应(neutralization reaction)
有生物 活性的抗原性物质（例如病毒、毒素、激素等）同抗体结合后，其
生物活性会丧失，称为中和反应。常用 的有病毒中和试验(virus
neutralization)。原理是：病毒可以使培养细胞出现 病变效应，结合了中和抗
体的病毒则失去这种毒力。将待检血清与病毒混合，再接种培养细胞，根据细胞
病变效应的变化情况来判断病毒是否被中和，同时计算“中和指数”即可反映中
和抗体的效价。 该试验可对病毒分型，也可检测患者血清中的抗病毒中和抗体。
免疫标记技术


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免疫标记技术利用酶、荧光素、生物素-亲和素、胶体金、 发光物质以及放
射性核素等标记物来标记抗原或抗体，再与标本中的抗体或抗原反应，最后测定
复合物中的标记物，通过标记物的信号放大作用，大大提高了反应的敏感性，应
用领域也得到了拓展。
依据标记物的不同，标记免疫技术可分为以下几种：酶标记、荧光素标记、
生物素- 亲和素标记、胶体金标记、发光物质标记以及放射性核素标记等标记免
疫技术。
酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，E LISA)是固相酶
免疫测定中最具代表性的一种。该技术利用酶的放大效应，大大提高了灵敏度。它主要有三种试剂：①固相抗原或抗体，即把抗原或抗体用合适的方法连接到固
相载体表面，同时保 留它们的免疫活性；②酶标抗原或抗体，即把某些酶用合适
的方法连接到抗原或抗体表面，同时保留它们 的免疫活性以及酶的催化活性。常
用的酶是辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)；③酶作用 的底物，一般是能
发生颜色改变的化合物（也叫显色剂），还可以是发光类化学物质。
(一)双抗体夹心法检测标本中的抗原
（二）间接法常用于检测抗体，
荧光免疫技术
利用荧光素的示踪特性，将荧光素标记在抗体上获得荧光抗体，再用它对组织或细胞内的抗原进行定位，称为荧光抗体技术(fluorescent antibody
t echnique)。常用的荧光素有异硫氰酸荧光素(FITC)和罗丹明(RIB200)。前者激
发后呈现明亮的黄绿色荧光，后者则呈现红色荧光。
（一）荧光抗体技术
1、荧光抗体显微技术
将荧光抗体与组织切片或细胞表面的抗原进行反应，用荧光显微 镜观察，在
黑暗背景下抗原结合部位可见到明亮的特异性荧光。由此可对组织或细胞表面的
抗原 进行鉴定和定位。又可分为直接法和间接法两种。
（1）直接法 多用于检测抗原。原理是：将针 对抗原的荧光抗体直接滴加于标
本上，使之与抗原发生特异性结合。本法简便，特异性高，本底低，但敏 感度也
低。

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（2）间接法 可 用于检测抗原和抗体。原理是（图14-5）：先将针对抗原的
抗体（第一抗体）滴加于标本上，使之与 抗原发生特异性结合，再滴加抗第一抗
体的荧光抗体（第二抗体），使之同第一抗体结合。本法灵敏度高 ，而且在检测
不同抗原时只需要一种荧光抗体。
2、流式细胞术
是荧光抗体技术同 流式细胞仪分离技术的结合。经特异性荧光抗体染色的游
离细胞逐个从流式细胞仪的喷嘴流出，再在电磁 场的作用下发生偏转，同时在单
色激光照射下发出荧光，不同细胞的荧光信号及偏转角度均不同，细胞得 以分离。
这种方法可区分细胞大小、折散率、表面分子等，故常用于T、B等细胞亚群的
检测及 分离。
化学发光免疫技术
化学发光免疫测定技术是指将化学发光反应与抗原抗体反应相结合 ，以检测
抗原或抗体的方法。它可分为二类，一类是以发光剂作为酶免疫测定的底物，通
过发光 反应增强测定的敏感性；另一类是直接用发光剂标记抗体或抗原，再进行
抗原抗体反应，通过检测发光信 号来测定抗原或抗体的含量。
胶体金免疫技术
胶体金(colloidal gold)也 称金溶胶(goldsol)，是由金盐被还原成金原子
后形成的金颗粒悬液。以胶体金为标记物的抗原 抗体反应即为胶体金免疫技术。
可分为两大类：一类是用于确定物质是否存在及其性质，包括免疫电镜技 术和免
疫组织化学技术。在免疫组织化学技术中，将结合有蛋白质的胶体金复合物称为
金探针。 另一类是用于物质的半定量测定，常与膜载体技术结合，包括斑点金免
疫渗滤试验和斑点金免疫层析试验 等，这类技术中应用的胶体金与抗原或抗体形
成的复合物称为免疫金(immunogold)，这类技 术简便且快速，得到了广泛应用。
如斑点金免疫渗滤试验 (dot immunogold filtration assay，DIGFA)和斑点金
免疫层析试验(dot immunochromatographic assay，DICA)简称ICA。
细胞分离法
免疫细胞主要包括T淋巴细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞等。在体外对各种免
疫细胞分别作鉴定、 计数和功能测定，是观察机体免疫状态的一种重要手段。为
此，须将各种免疫细胞从血液或脏器中分离出 来。细胞分离的原理大致有两大类，

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一类是根据 各种细胞的大小、沉降率、粘附和吞噬能力加以区分，另一类是按照
各种细胞的表面标志，包括细胞表面 的抗原和受体加以选择性分离。有时为了获
得所需细胞，还可多次用不同方法组合处理。
（一）外周血单个核细胞的分离
外周血中的白细胞由单个核细胞和多核粒细胞组成，单个核细 胞又包括淋巴
细胞和单核细胞2种。这些细胞的密度均不相同。红细胞和多核粒细胞的密度为
1 .090左右，淋巴细胞和单核细胞为1.075～1.090，血小板为1.030～1.035。
如 果用密度介于1.075～1.092之间的等渗溶液(分层液)为介质进行密度梯度离
心，则不同密度 的细胞按相应密度梯度悬浮于分层液中。常用的是聚蔗糖-泛影
葡胺（商品名Ficoll- Hypaque）分层液。分离人外周血单个核细胞时
Ficoll-Hypaque分层液密度以1. 077±0.001为佳。先在试管底部加入适量分层
液，然后在分层液上面小心加入经Hanks液或 PBS液稀释的肝素抗凝全血，注意
保持两者分界面清晰。水平离心后，试管中的液体和细胞分为几层。 上层为血浆
层，血小板悬浮于其中；中层为分层液，在上层（血浆层）和中层（分层液）的
交界 面是密集的单个核细胞层，呈白膜状；底层为沉积的红细胞和多核白细胞。
本法分离单个核细胞纯度可达 95%，淋巴细胞约占90%～95%。
（三）淋巴细胞及其亚群的分离
为研究免疫细胞的功能，需要高纯度的淋巴细胞群或其亚群，常用的分离方
法有流式细胞仪法 流式细胞仪能有效分离不同亚群细胞，它主要由4部分组
成：细胞流动系统及气压流速控制系统，激光系 统，检测与讯号处理系统，细胞
分选系统。该方法的原理是：细胞经荧光染色后，在高速流动系统作用下 细胞排
成单行，逐个流经检测区。在检测区，单个细胞同时受到激光束的照射和电场力
的作用。 单个细胞经激光束照射后产生荧光和散射光，不同类型的细胞产生的光
电信号不同。同时，不同类型的细 胞带电量不同，受到的电场力不同，从而偏转
角度不同，因此进入不同的收集管，细胞得以分离。该方法 准确快速，细胞活力
不受损且无菌，但仪器昂贵，故多用于科学研究。
NK细胞的杀伤活性检测方法主要有3种。
（1）形态法 将靶细胞与NK细胞混合作 用，再用台盼蓝或伊红Y等染料染色，
分别计数染色的死细胞和未染色的活细胞，由此推算NK细胞的杀 伤活性。

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（2）酶释放法 将NK细胞 与靶细胞共同温育，一段时间后取上清液检测靶细
胞遭破坏后释放的乳酸脱氢酶或碱性磷酸酶含量，即可 反映NK细胞的杀伤活性。
（3）同位素掺入法 先将靶细胞培养在加有
3
H- TdR的培养液中，靶细胞胞核
以
3
H-TdR为原料合成新的DNA。接着用NK细 胞处理上述靶细胞，靶细胞膜被破
坏，细胞核游离出来。再用胰酶和DNA酶处理可使游离细胞核的内容 物释放。释
放的
3
H-TdR的放射性即代表NK细胞的杀伤活性。
体液免疫检测
B细胞的表面标志包括表面抗原和表面受体两大类。检测这些表面标志 一方
面可用来研究B细胞各分化发育阶段的特性，另一方面可以鉴定和计数各阶段B
细胞的分布 以及患病时的动态变化情况。
1、B细胞表面抗原的检测
不同亚群的B细胞表面有不同的分 化抗原（CD）。应用相应的CD单克隆抗体，
通过间接荧光免疫法、酶免疫组化法或化学发光法可以检 测不同的CD抗原。
2、B细胞表面受体的检测
B细胞表面有膜免疫球蛋白(SmIg)、 Fc受体、补体受体、EB病毒受体等受
体。SmIg为B细胞所特有，可用以B细胞计数和鉴定。以S mIg的检测为例，一
般采用荧光法。首先从外周血中分离出富含淋巴细胞的单个核细胞(periph eral
blood mononuclear cell,PBM)，再将PBM用荧光标记的抗人 Ig抗体染色，呈现
荧光的细胞为带有相应SmIg的B细胞。使用的是荧光抗体有两类，一类是多价< br>抗人Ig抗体，另一类是单价抗各类Ig抗体，即抗IgM、抗IgG、抗IgA、抗IgE
等抗 体。B细胞同荧光抗体结合后，细胞膜表面呈现不同形式的荧光。开始均匀
分布呈环状，其后集中在某些 部位呈斑点状，然后又聚集在某一部位呈帽状，最
后可被吞饮入胞浆直至荧光消失。这是由于细胞膜在体 温条件下呈半液体状，故
镶嵌物能在其中移动。荧光抗体染色后，观察时间不能超过30min，以防止 帽状
物形成或被吞饮，从而影响荧光染色效果。在人外周血中，带有SmIgM的B细胞
数目最 多，检测SmIgM即可反映B细胞的数量。
3、B细胞功能的检测
B细胞受抗原或促有丝 分裂原刺激后，发生分裂增殖并继续分化成熟为浆细
胞，随后分泌相应的Ig。若B细胞功能减低或缺陷 ，则体内Ig量下降或缺如；

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同时，B细胞对 抗原的应答能力减弱或缺如，仅产生极低或不能产生特异性抗体。
测定血清中各种Ig量或者B细胞产生 特异性抗体的能力，可判断B细胞功能。
各类Ig量的测定可用单向琼脂扩散法或火箭电泳法或免疫比浊 法等。
（1）溶血空斑形成试验(plaque forming cell,PFC ) P FC用于检测浆细胞
产生抗体的能力。其原理是：将绵羊红细胞(SRBC)免疫小鼠，4天后取出脾细 胞，
加入SRBC及补体，与温热的琼脂混合，在玻片上浇注成薄层，37℃温育后观察
溶血空 斑数目与大小。由于浆细胞分泌抗SRBC抗体，同周围SRBC发生结合，在
补体参与下导致SRBC 溶血，形成一个肉眼可见的圆形透明溶血区，称为溶血空
斑(plaque)。每一个空斑代表一个浆细 胞，空斑大小表示抗体分泌量的多少。如
果预先将其它抗原连接在SRBC上，再进行上述实验，则可检 测产生针对该抗原
的特异性抗体的浆细胞。
（2）B细胞增殖能力的试验 某些促有丝分 裂原（如细菌脂多糖）能刺激B细
胞增殖，使得B细胞能够利用培养液中的
3
H-Td R为原料合成新的DNA。检测B
细胞胞核内放射性同位素的量，即可反映B细胞的增殖能力。
细胞免疫测定
1、T细胞表面标志的检测
（1）CD抗原的检测 T细胞 表面有多种CD抗原。用单克隆抗体检测T细胞表
面的CD抗原即可鉴定和计数T细胞。以间接荧光法为 例：将外周血单个核细胞
分别与相应单克隆抗体(如抗CD2、抗CD4、抗CD8)结合，再加荧光素 标记的抗
小鼠IgG抗体，观察并计数200个单个核细胞，以荧光细胞数与计数细胞总数之
比 ，求得带有相应CD抗原的T细胞的百分率。
2、T细胞计数
现在多用间接荧光法。方法是 ：将人的PBM分成三份，分别用小鼠抗人CD3、
小鼠抗人CD4和小鼠抗人CD8 的单克隆抗体作 第一抗体与PBM结合，再用FITC
标记的兔抗小鼠IgG抗体作第二抗体进行间接免疫荧光染色，用 荧光显微镜或流
式细胞仪检测结果。由于绝大多数T细胞表面都有CD3抗原，故PBM中被CD3抗体染上荧光的细胞（CD3
+
细胞）数目，即代表了T细胞总数。正常人的T细胞
总数为70%～80%。正常人的CD4
+
细胞数和CD8
+
细胞数之和应 与CD3
+
细胞数一致，
且两者的比值约为21，而艾滋病患者比值小于1.7。

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3、T细胞功能的检测
（1）T细胞增殖试验 又叫T细胞转化试验。一些刺激物在体内或体外可以
刺激T细胞增殖，使 得T细胞代谢和形态发生改变，转变成为淋巴母细胞。淋巴
母细胞的特征是：蛋白质和核酸合成增加，细 胞体积变大、胞浆增多伴有空泡、
核仁明显、染色质疏松。淋巴母细胞的检测可利用形态学改变法，也可 利用氚标
记的胸腺嘧啶核苷（
3
H-TdR）掺入法。依据刺激物的不同，T细胞转化 试验分为
非特异性和特异性两大类。前者用非抗原性的促有丝分裂原做刺激物，通常为植
物血凝 素(phytoagglutinin，PHA)和刀豆素蛋白A(concanavalin A，ConA) ；后
者用特异性抗原做刺激物，包括破伤风类毒素、结核菌素纯化蛋白衍生物
(purifie d protein derivative，PPD)和旧结核菌素（old tubium,OT）等，还< br>包括同种异型抗原（例如HLA）。虽然T细胞对促有丝分裂原和特异性抗原的识
别过程不同，但 激活后所发生的分裂和增殖过程却是相同的。因此T细胞非特异
性转化试验可以间接反映T细胞对特异性 抗原的应答能力。
（2）T细胞介导的细胞毒试验 T
C
细胞、NK细胞、 LAK细胞等淋巴细胞可以
直接破坏或溶解靶细胞，称之为淋巴细胞介导的细胞毒作用(lymphoc yte
mediated cytotoxicity，LMC)。它可用来评价机体细胞免疫水平。 例如测定肿
瘤患者淋巴细胞杀伤肿瘤细胞的能力可以判断预后和观察疗效。该试验的原理是
选用 适当的靶细胞，常用的是人肿瘤细胞株（如肝癌、食管癌、胃癌等细胞株），
经培养后制成单个细胞悬液 ，再与受检的淋巴细胞混合，温育后观察肿瘤细胞被
杀伤情况。
①形态学检查法：淋巴细胞与 肿瘤细胞共同孵育，瑞氏染色，显微镜计数残留的
肿瘤细胞数，计算淋巴细胞抑制肿瘤细胞生长的抑制率 。抑制率%＝(对照组平
均残留肿瘤细胞数－实验组平均残留肿瘤细胞数)÷对照组平均残留肿瘤细胞数
×100%。②
51
Cr释放法：先将含
51
Cr元素的无机盐溶液 与靶细胞混合培养，
51
Cr
进入靶细胞与胞浆蛋白结合。再加入待检T细胞与51
Cr标记的靶细胞共同培养，
靶细胞被杀伤，导致胞浆中的
51
C r重新释放出来。用γ射线测量仪测定上清液
的cpm值，计算
51
Cr释放率，即可 反映T细胞的细胞毒活性高低。该试验还可
用来检测Tc细胞的效应功能、经IgG介导的ADCC效应 、NK细胞的自然杀伤
作用。

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（3）PPD皮肤试验 是一种检测细胞免疫功能的体内试验。原理是迟发型（Ⅳ
型）超 敏反应，方法是：在前臂皮内注射少量结核菌纯蛋白衍生物(PPD)，24h～
48h后，测量红肿硬 结的大小，硬结直径大于10mm即为皮试阳性。皮试阳性一
般表明受试者对结核菌产生了一定的细胞免 疫能力。皮试阴性则有3种可能性，
一种是受试者从未接触过该抗原，一种是细胞免疫功能缺损，一种是 严重感染(例
如麻疹、慢性播散性结核)造成的暂时性无应答。
4、细胞因子检测
检测细胞因子的方法主要有生物学法、免疫学法和分子生物学法3大类。
（1）生物学法 是根据各种细胞因子的不同生物学活性而设计的检测细胞因
子的方法。各种细胞因子具有不同的生物学活 性，例如白介素-2（IL-2）可以促
进淋巴细胞增殖，肿瘤坏死因子（TNF）能够杀伤肿瘤细胞， 集落刺激因子（CSF）
可以刺激造血细胞集落形成，干扰素（IFN）可以保护细胞免受病毒攻击。利 用
某一细胞因子独特的生物学活性，即可对其进行检测。①细胞增殖法：根据许多
细胞因子有促 使细胞生长的活性而设计。首先筛选并培养出只依赖某一种细胞因
子的依赖性细胞株。通常情况下它们不 能存活，只有加入相应细胞因子后才能增
殖，并且增殖程度与细胞因子水平呈正比关系。这些细胞的增殖 情况可通过显微
镜直接计数、
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H-TdR掺入法等加以测定。例如应用来自于小鼠的 IL-2依赖株
CTLL-2就可以测定IL-2的含量。②靶细胞杀伤法：根据某些细胞因子能在体外
杀伤靶细胞而设计。以TNF的测定为例：用L929细胞作为靶细胞，加入TNF后
靶细胞的 死亡率与TNF活性成正比。靶细胞的死亡率可用
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Cr释放法测定。③细
胞病变抑 制法：病毒感染靶细胞可引起细胞病变，IFN可以抑制病毒增殖，从而
靶细胞的病变效应也被抑制。利 用这个特点可以检测IFN。
（2）免疫学法 大多数细胞因子化学本质是蛋白质或多肽，有较强 的抗原性。
用细胞因子免疫动物可获得抗细胞因子的多价抗血清或单克隆抗体。利用抗原抗
体反 应可以检测细胞因子的含量，还可以检测细胞因子在细胞内的合成及分布情
况。常用的方法包括ELIS A和免疫印迹法。免疫学法依据细胞因子的抗原性而设
计，检测结果反映了细胞因子的含量，但不能真实 反映细胞因子的生物学活性。
因此要了解细胞因子的生物学活性，还必须结合生物学法。例如用ELIS A法检测
病人血清中TNF水平，简便快速、特异性高、敏感性强，但该实验结果不能真实

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地反映TNF的生物学活性。
（3）分子生物学法 分子生物学法是指利用核酸探针来检测细胞因子基因表
达情况，即 检测细胞因子mRNA的水平。核酸探针是指用放射性同位素或其他标
记物(如生物素、酶等)标记并与 目的基因互补的DNA或RNA片段。根据其来源可
分为cDNA探针、寡聚核苷酸探针、基因组基因探 针。利用核酸探针检测细胞因
子mRNA表达的方法很多，常用的有斑点杂交、Northernblo t、逆转录PCR
（RT-PCR），细胞或组织原位杂交等方法。分子生物学法检测的是细胞因子mR NA
的水平，不能直接提供细胞因子的浓度及生物学活性等资料，主要适用于机制探
讨。
巨噬细胞功能的检测
巨噬细胞具有较强的吞噬功能，常用细胞性抗原作为被吞噬颗粒， 如鸡红细
胞。检测原理是将巨噬细胞与适量的鸡红细胞混合后，置37℃保温0.5 h～1h，
最后离心取巨噬细胞制成涂片，染色镜检，计数200个巨噬细胞，分别计算吞噬
百分比和吞噬指数。 吞噬百分比＝吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数÷200×100%。
吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞的总数÷ 吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数。
HLA DNA分型法
是利用PCR技术将标本中的少量D NA上的HLA基因片段大量扩增，再进行产
物鉴定。特点是灵敏度高，试剂易得，对标本要求不高，陈 旧或微量标本都能进
行检测，故已逐步取代了传统的分型方法，被广泛应用于移植医学、法医学等多个领域。

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