常见tag蛋白标签介绍讲课讲稿
-
常
见
t
a
< br>g
蛋
标
签
介
白
绍
蛋白标签
蛋白标签（
proteintag
）是指利用
DNA
体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和
纯化等。随
着技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。目
前，这些蛋白标签已在基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应
用。
美国
GeneCopoeia
< br>（复能基因）为客户提供
50
多种蛋白标签，可以满足客
户的不同需求，包括各种最新型的标签，如：
SNAP-
Tag
™
、
Halo Tag™
、
AviTag™
、
Sumo
等；也提供齐全的各种常用标签，如
eGFP
、
His
、
Flag
等等标签
。
以下是部分蛋白标签的特性介绍，更加详细的介绍可在查询
克隆产品的结果列表里面看到各种推荐的蛋白标签和载体。
His6
Flag
GST
MBP
His-MBP
HA
eGFP/CFP/YFP
Myc
His-Myc
His-
AviTag™
Sumo
His-Sumo
SNAP-
Tag™
Halo Tag™
纯化
+
+
+
+
++
+
++
++
++
++
促进溶解度
+/-
+/-
+
++
+
+++
++
抗体效价
+/-
+
+
+
+
+
+
+
++
+
+
+
+
细胞标记
+++
++
+++
+++
TrxHIS
His6
是指六个组氨
酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的
C
末端或
N
末端。当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构
成独
特的结构特征（结合配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，
可用于固定化金属螯合层析
(IMAC)
，对重组蛋白进行分离
纯化。
使
用
His-
tag
有下面优点：
•
•
•
•
•
•
标签的分子量小，只有
~0.84KD
，而
GST
和蛋白
A
分别为
~26KD
和
~30KD
，一般不影响目标蛋白的功能；
His<
/p>
标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水
性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时
特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过
金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性；
His
标签融合蛋白也被用于蛋白质
-
蛋白质、蛋白质
-DNA
相互作
用研究；
His
标签免疫原性相对较
低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体。
可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；
可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。
Flag
标签蛋白
< br>Flag
标签蛋白为编码
8
个氨
基酸的亲水性多肽（
DYKDDDDK
），同时载体中构建的<
/p>
Kozak
序列使得带有
FLAG
的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更
高。
FLAG
作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点：
•
•
•
定。
<
/p>
FLAG
作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且
通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行
下游研究。
融合
FLAG
的目的蛋白，可以直接通过
FLAG
进行亲和层析，此层析为
非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。
FLAG
作为标签蛋白，其可以被抗
FLAG
< br>的抗体识别，这样就方便通过
Western Blot
、
ELISA
等方法对含有
FLAG<
/p>
的融合蛋白进行检测、鉴
•
融合在
N
端的
FLAG<
/p>
，其可以被肠激酶切除（
DDDK
），从
而得到特异的目的蛋白。因此现
FLAG
标签已广泛的应用于蛋
白表达、纯化、鉴
定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。
MBP
（麦芽糖结合蛋白）
MBP
（麦芽糖结合蛋白）标签蛋白大小为
40
kDa
，由大肠杆菌
K12
的
malE
基因编码。
MBP
可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核
蛋白。
< br>MBP
标签可通过免疫分析很方便地检测。有必要用位点专一的蛋白酶切割标签。
如果蛋白在细菌中表达，
MBP
可以融合在蛋白的
N
端或
C
端。
纯化：融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化。结合的融合蛋白可用<
/p>
10mM
麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。结合亲和力在微摩尔范
围。一些融合蛋
白在
0.2% Triton
X-100
或
0.25% Tween
20
存在下不能有效结合，而其他融合蛋白则不受影响。
缓冲条件为
pH7.0
到
< br>8.5
，盐浓度可高达
1M
，但
不能使
用变性剂。如果要去除
MBP
融
合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。