HE染色常见问题与对策
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2021年01月22日 15:41
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-读后感要怎么写
HE
染色常见问题与对策
HE
是最基本的也是最重要的病理学染色 技术。一张质量上乘的
HE
切片是病理医生得
以做出正确诊断的关键。许多所谓的“疑 难病理案例”
,
大多数是由于制片质量差所造成的。
制片质量差不仅在中小医院病理科 会发生
,
有些大医院也会出现。因为
,
HE
染色是一种多步
骤、
多因素决定的实验方法
,
无论是手工还是机器操作
,
都存在着 许多影响因素
,
甚至会出现不
理想的染色结果
,
从而导致误判和误诊 。
所以
,
除提高病理医生的诊断水平外
,
培训病理技术人
员 、提高技术人员的业务素质也是当务之急。本文对
HE
染色中常见的几个问题及其对策
,
进行分析与讨论如下。
1
切片在脱蜡后出现大片白色的斑点
原因
:
由于烤
(
烘
)
片温度太低
,
玻片在脱蜡前没有充分烤
(
烘
)
干
;
切片在二甲苯停留时间不
足
,
或二甲苯使用过久,
造成脱蜡不尽。
对策
:
如果玻片是由于没有烤
(
烘
)
,
先用无水乙醇处理去除玻片上的水分
,
然后重新用二
甲苯脱去石蜡。如果烤
(
烘
)
干不足的现象比较严重
,
可能导致切片脱落
,
则无法补救。如果白
色斑点是由于切片在二甲苯停留时间不足造成
,
或使用的二甲苯过 久
,
切片则需退回到二甲苯
停留时间相对长些
,
或更换二甲苯
,
脱色、漂白、重新染色。
2
细胞核染色苍白、暗淡
,
即苏木精染色太淡
原因
:
此类问题可能有
3
个影响因素
,
切片在苏木精染色液停留时间太短
;
苏木精染色液
过度氧化
,
失去染色能力
,
不能再继续使用
;
分化步骤处理时间过长。
如果是骨组织细胞核暗淡
,
则多数是由于 脱钙过度造成。
对策
:
切片重新染色。如果组织在酸性固定液如
Z enker
、
Bouin
及非中性缓冲甲醛液固
定时间过长
,
细胞核染色能力将减弱
,
须增加其在苏木精染色液的时间
,
或用一些方法增 加组
织的嗜碱性
,
以改善细胞核的着色。例如
:
建议上述组织切片最 好使用
Weigert
铁苏木精染色
液
;
如果组织是用
Ze nker
液固定的
,
可将切片脱蜡后放在
5%
碳酸氢钠溶液
3
～
4 h,
流水冲洗
5
min
后染色
;
如果组织是用
Bouin
液固定的
,
可将切片脱蜡后放在
5%碳酸锂
1
h,
流水冲洗
10
min
后染色。
3
细胞核过染
,
即苏 木精染色太深
,
甚至苏木精染液的分布占据了细胞质的位置
原因
:
此类问题可能有
3
个影响因素
,
即切片在苏木精染色液停留过长、切 片太厚、分化
步骤时间太短。
对策
:
如果切片不是因为太厚
(
用显微镜仔细上下调节微调
,
只有一二层细胞核层次
)
,脱
色、漂白、重新染色
,
对于染色和分化时间做些适当的调整。如果确定是由于切 片太厚导致
的细胞核过染
,
则需要重新切片。
4
细胞核呈红、棕色改变
原因
:
主要有苏木精染色液过度氧化和切片在苏木精染液染色后返蓝不足。
对策
:
首先
,
每次染色之前检查苏木精染色液的染色能力
,
发现氧化过度应及时更换。
其次
,
可用流水、
温水或弱碱性溶液如稀 氨水、
0. 2%
碳酸氢钠等
,
在苏木精染色后
,
给切片以 足够的
蓝化时间。
5
伊红着色淡
原因
:
伊红染液的
pH
值可能大于
5;
也可能是蓝化液残留过多
;
切片太薄
;
或切片经伊红染
色后在乙醇脱水时间过长。
对策
:
检查伊红染液的
pH
值
,
如果必要的话
,
用乙酸将其调节在
416
～
510
之间
,
从而使伊
红染色色彩艳丽。确保每次蓝化步骤完成后
,
使用的弱碱性溶液被充分洗去
,
玻片上没有残留
的弱碱性溶液。检查切片的厚度。脱水时不要让切片在低浓度乙醇停留时间过长
,
因为含水
多的低浓度乙醇会将伊红的颜色分化掉。