几种真菌的分离与鉴定
-
常见真菌的分离与鉴定
病原真菌的一般特性
真菌（
Fungi
）是微生物中的一个大类，是一群数目庞大的细胞生物，估计
全世界已有记载的真菌有
10
万种以上
。它们的子实体小者用显微镜才能见到，
大者可达数十厘米，
它
们共同特征是具有真正的细胞核，
产生孢子和不含叶绿素，
以寄
生或腐生等方式吸取养料，
仅少数类群为单细胞，
其他都有分支
或不分支的
丝状体，能进行有性或无性繁殖，具有纤维素（或其他葡聚糖）或几丁质的微
纤
维或两者兼有的细胞壁的有机体。
对人类和动物致病的真菌大
约
100
余种，
属于
< br>病原真菌。
一、基本性状
（一）形态结构
真菌分单细胞真菌与
多细胞真菌两大类，
前者属于酵母菌
（
yeast
）
一般呈球形或
卵圆形，后
者称为霉菌（
mold
）或丝状真菌，呈丝状分枝，菌丝交织象
绒球状，
另有一些真菌可因寄生环境及培养条件（养料、温度、氧气等）的不同可交替出
现两种形态，即在室温中呈霉菌型，在
37
℃或体内呈单细胞的酵母型，这类真
菌有双相性，所以称之为双态真菌或二相真菌。
真菌的细胞结构与一般植物细胞相似，有定型的细胞核及完善
的细胞器，
但胞壁与细菌胞壁不同，不含粘肽而是由角质及葡聚糖组成，也含有脂多糖蛋
白质，其中酵母菌及类酵母菌皆以出芽增殖，不生长真菌丝，革兰氏染色呈阳
性，丝状真菌分菌丝及孢子两部分
，形态多种多样，分述如下。
1
．菌丝（
Hypha
）
真菌在合适的环境中，由孢子生出
嫩芽，称为芽管。芽
管逐渐延长呈丝状，
称菌丝。
菌丝继续生长并生长分枝，
增殖的菌丝交织组成菌
丝
体。
其中一部分菌丝深入被寄生的物体或培养基中吸取养料，
称
为营养菌丝体。
另一部分菌丝向空间生长，
称为气生菌丝体。<
/p>
气生菌丝体能产生孢子者称为生殖
菌丝体。
菌丝中各个细胞间有明显分隔者，
称为有隔菌丝。
主要见于病
原性真菌。
很多非病原真菌的菌丝无明显分隔，
称为无隔菌丝。
有些菌丝可呈各种特殊形式，
如球拍状、破梳状、螺旋状、结节
状、关节状、鹿角状、假菌丝。
2
．
孢子
<
/p>
生成孢子是真菌扩大繁殖的一种方式。
真菌孢子的抵抗力、
形态及
作用等均与细菌芽胞不同，
分为无性孢
子及有性孢子两大类。
不经过两性细胞的
结合而形成的孢子叫无
性孢子，
这一繁殖过程称为无性繁殖。
常见的无性孢子有
5
种：关节孢子、厚壁孢子、孢子囊孢子、芽孢和分生孢子。病原真菌
属于不完
全菌纲，很少产生有性孢子，大多数是无性孢子。
<
/p>
（
1
）
厚壁孢子
：
当真菌在不利环境中，
由菌丝内胞浆缩浓和胞壁增厚而成，<
/p>
呈圆形。当环境好转时可生成芽管成长为菌丝。
（
2
）关节孢子：菌丝断裂形成长方形两端略钝圆的孢
子叫关节孢子。如白
地霉和粗球孢子菌。
（
3
）孢子囊孢子：为鞭毛菌和接合菌的无性生殖形式。孢
子囊中所含的孢
子来源于分枝菌丝或胞囊梗顶端膨大形成孢子囊，
囊内原生质浓缩集聚，
割裂而
成，一般数目较多，孢子囊形态
多样，因种而异。
（
4
）芽生孢子：由菌细胞出芽生成，见于念珠菌及隐球菌，前者（类酵母
菌）出
芽后孢子伸长呈丝状，但不见与母细胞分离，称为假菌丝，在假菌丝上的
收缩点也可出芽
成芽生孢子。
（
5
< br>）分生孢子：是子囊菌和半知菌的无性孢子，也是半知菌分类的主要依
据，单细胞
的分生孢子称小分生孢子，有蒂或无蒂，侧生或游离，分散或成群，
圆形、梨形、卵圆形
或其它形状，表面粗糙或光滑，或有或无各种纹饰。多细胞
的分生孢子称大分生孢子，有
纺锤形、棒形、球棍形、镰刀形及其它形状，两端
尖或圆或一端圆，厚壁或薄壁，壁光滑
或粗糙，有色或无色，分隔有多有少。
（二）培养特性及繁殖方式
1
．培养特性
大多数真菌对营养要求不高，只需要水、盐，简单的氮源及碳
水化合物就可生长，一般
常用沙堡氏琼脂基（主要成分葡萄糖
4%
、蛋白胨
1%
、
琼脂
2%
）
培养都能生长。
但需要弱酸性
< br>（
pH 4
～
6
）
、
较低孵育温度
（
22
～
28
℃）
，
充分温度和氧气供应才能生长良好。侵害内脏的某些真菌在
37
℃含血的培养基
中生长良好。
真菌生长都比较缓慢，
大多需孵育数天后才成明显菌落，
菌落有下
列三种类型：
（
1
）酵母型菌落：外观湿润稠软致密，类似一般细菌菌落，镜检只见有
圆
形或椭圆形生芽细胞（例如隐球菌的菌落）。
（
2
）类酵母型菌落：外观性状似酵母型菌落，镜检
除见有出芽的细胞外，
尚可见到假菌丝（例如念珠菌的菌落）。
（
3
）丝状型菌落：由多数分枝的菌丝
体向上生长组成疏松的绒球状，表面
有很多孢子，
显示各种色泽
，
菌落可呈棉絮状
绒球状
粉末状或石膏样，
其正面
和背面可显示各种不同色素，
常作为鉴定菌
种的参考。
镜检可见有纵横交织的菌
丝及各种孢子（例如各种癣
菌的菌落）。
2
．繁殖方式
有多样性，包括出芽增殖，菌丝增长，菌丝分枝和断裂，产生
无性孢子及有性孢子进行
繁殖，因此它繁殖力很强，但生长速度较慢。
（三）变异性和抵抗力
真菌很容易发
生变异，
在人工培养基中多次移种或孵育过久，
就可出现形态<
/p>
结构、菌落性状、色素以及各种生理性状（包括毒力）的改变，用不同的培养基
和温度培养真菌，
其性状也有改变，
真菌对干燥阳
光紫外线及一般化学消毒剂耐
受性却较强。但对热的抵抗力却不强。
60
℃以上
1
小时即可杀死孢子及
其菌丝，
在
1%
～
3%
石炭酸、
2.5%
碘酊、
0.1%
升汞及
10%
甲醛中可被灭活。用甲醛气体
熏蒸被真菌污染的衣物用具，
可杀灭真菌菌丝及其孢子。
但真菌对一般抗菌素及
磺胺药均不敏
感。只对二性霉素、酮康唑、制霉菌素等非常敏感，治疗真菌感染
常用此药。
（四）致病性与免疫性
1
．
致病性
病原真菌的致病机制还是一个未完全解决的问题；
根据其侵害部
位，主要分为下列两类：
（
1
）浅部真菌病：主要由癣菌引起，大多为外源感染，常易侵害皮肤、指
（趾）甲及须发等含角质的组织，引起癣症。
（
2
）深部真菌病：可由各种真菌引起，包括类酵母菌
、二相真菌及丝状菌。
侵害粘膜、皮下组织、内脏及脑膜等处，有时扩散全身，主要是内
源性感染，也
可由外源传染；前者是因机体抵抗力降低，如患重病，长期使用免疫抑制剂
，广
谱抗菌素或放射治疗，患恶性病，严重烧伤等时，造成体内菌群失调，以致常居
在体内的某些真菌（如白念珠菌），甚至平时不致病的环境中的真菌（如曲霉、
毛霉）等也会乘机侵害，一些传染性较强的内脏真菌病是内外源感染。
2
．免疫性
浅部真菌病一般在血中不产生特异性抗体，病后无免疫保护力，
只是儿童头癣等青春期后
头皮皮脂增多时可以自愈，
以后不再感染，
其他部位癣
症治愈后仍可再感染。深部真菌病虽可产生抗体，但无明显免疫保护作用。
临床常见的病原性真菌
一、
浅部真菌
（
—
）皮肤癣菌
皮肤癣菌又称皮肤丝状
真菌，有下列三属（见表
1
），都只侵犯体表角化组
织（皮肤，毛发及指甲和趾甲）。不侵害深部组织，或内脏，皆属外源性传染，
由接触患癣病人、动物（狗、猫、鼠、牛、马等）或染菌物体而感染。
1
．毛癣菌属
＊红色毛癣菌
（
1
）直接镜检：皮屑及甲屑，分枝分隔的菌丝有时可断裂或关节孢子状，
毛发：
发外型感染表现为发外孢子排列成串。
少数
为发内型感染孢子在发内排列
成链状；毛发穿孔试验阴性。
<
/p>
（
2
）培养特征：在葡萄糖蛋白胨琼脂，
25
℃，生长比较快，菌落形态有多
种
表现，镜检也不完全一样，常见有下列四种：
I
型：羊毛状：白
色羊毛状菌丝
充满斜面，典型的卷成筒状，边缘贴牢管壁，呈鲜红色，背面开始在中心有
一红
色小点，以后形成深红色环，最后成片为葡萄酒色，色素边缘划界非常明显。少
数
I
型菌株表现无红色色素，正面白色，背
面呈淡黄色类似石膏
I
型，亦有正面
白
色而背面呈灰黑色。
II
型：绒毛状：粉红色绒毛状菌丝生长，
占斜面
3/5
，菌
丝稀疏，透过菌丝可
见粉红色的基底，背面颜色同
I
型相同。
III
型：粉未状：菌
落表面稍有凸起，
呈粉末状，
粉红色，
约占斜面的
1
/2
～
2/3
，
背面同
I
型。
IV
< br>型：
沟纹状：菌落生长相对较慢，比以上三种类型为小，占斜面的
1/3
～
1/2
，菌落中
央凸起，
从中央向四周有排列比较整齐的放射状沟纹，
边缘整齐，
表面菌丝甚少。
开始微带黄色，以后变粉
红，背面同
I
型。
< br>（
3
）菌种鉴定：①菌落特征及色素；②大小分生孢子的
形态；③玉米粉吐
温琼脂上产生红色色素；④毛发穿孔试验阴性；⑤尿素酶试验阴性。<
/p>
＊须癣毛癣菌
（
1
）直接镜检：皮屑内见分枝分隔的菌丝，甲屑内为关节状
菌丝。毛发感
染为发外型，发内有时有菌丝。
（
2
）培养特性：在沙氏上生长较快，菌落形态可分为
两大类：毛型和粉型；
下列
I
、
II
型为毛型，
III
、
IV
、
V
型属粉型。自炎症明显的皮损中所分离出的菌
株多属粉型。毛型菌落外观均似红毛，应注
意鉴别。具体分型①羊毛状（
I
型），
又称趾间毛癣菌，菌落生长快，白色羊毛状。气生菌丝较多且长，排列紧密，充
满斜面，
好象红毛，正面雪白，背面淡黄色。镜检见较细分枝，分隔的菌丝，胞
浆浓。
有少量球形或长形小分生孢子，
无螺旋菌丝和大分生孢子。
间或可见球拍
菌丝及结节菌丝。②绒毛型（
II
型），生长快，菌落雪白。表面有紧密的细短气
生菌丝，中央可有乳头
状突起，边缘如刀切，背面棕黄色或棕红色。镜检见较细
的分枝、分隔的菌丝，小分生孢
子多，有时成葡萄串状，无螺旋菌丝或大分生孢
子；③乳皮状（
III
型），开始为乳白色菌丝，不久一部分菌落变为粉末样，色
微黄，光滑，似牛乳表面的一层薄膜，可一块块地挑取，中央有少许褶叠，边缘
不整齐
，
背面淡黄或棕黄色。
镜检见粗细不一，
分枝分隔的菌丝和大量螺旋菌丝，
间或可见破梳状菌丝，结节菌丝及球拍菌丝，大分生
孢子少，棒状，两端圆，与
分生孢子梗的连接处较窄，薄壁光滑，小分生孢子多，球形或
长形，有时成葡萄
串状排列。④粉末状（
IV
< br>型），菌落粉末状，表面平坦、光滑。间或有少数白
色气生菌丝，中央有乳头状凸
起，边缘锯齿状。菌落生长快，充满斜面，色黄或
奶油色，外观像石小、背面棕黄或棕红
色。⑤颗粒状（
V
型）：生长快，菌落粉
样，表面不平，呈颗粒状。有不规则的褶叠或沟纹，边缘不整齐。下面色黄带红
或棕黄
。
背面棕红色。
IV
、
V
镜检均见大量棒状大分生孢子及无数圆形的小分生
孢
子，少数长型。游离或葡萄状成串，有螺旋菌丝和球拍菌丝。
（
3
）菌种鉴定：①菌落形态；②菌丝较细，是皮肤癣菌中最细
的一种；③
螺旋菌丝多见；
④大分生孢子的形态和球形小分生孢
子；
⑤尿素酶阳性；
⑥毛发
穿孔阳性。
＊紫色毛癣菌
（
1
）直接镜检：皮屑、甲屑内可见分枝分隔的菌丝或成串
的孢子，病发取
黑点部位的断发，毛发损害为发内型大孢子，呈关节型排列，充满整个发
内，故
毛发出皮即断。
（
2
）培养特性：在沙氏琼脂培养基室温培养菌落生长慢，开始为圆形、白<
/p>
色、潮湿发亮的菌落，类似酵母；以后中央褶叠或突起，产生紫色色素，并逐渐
扩大，或中央紫色，边缘淡红色，最外围有一圈白色的环。培养基颜色不变，边
缘无放射状菌丝，整齐如刀切，下沉不明显，背面无色至深紫色，少数菌株无颜
色，
呈无色紫色毛癣菌，镜检见粗细不一的菌丝，分隔较密，胞浆淡，有很多不
规则的突起和
肿胀，
但无鹿角菌丝。
厚壁孢子多，
多
为间生，
偶见小分生孢子
2
～
5
个大生分生孢子。
（
3
）菌种鉴定：①菌落形态，紫色色
素；②
VitB
能促进菌落生长，形成
大分生孢子；③发内型感染。
2
．小孢子菌属
＊羊毛状小孢子菌
（
1
）
直接镜检：皮屑内见分枝、分隔的菌丝，病发为发外型感染。
（
2
）
培养特
性：
在沙氏琼脂培养基上室温生长快。
开始为黄色绒毛样生长，
2
周后菌丝较多，呈羊毛状，可充满大部分斜面。中央趋向粉未
化。正面桔黄，
背面红棕色，
平皿中培养的菌落表面中央可有少
数同心园，
无放射状沟纹。
生长
约
4-5
周后开始变异，菌丝增多，大分生孢子减少或消失。镜检见大
量纺锤形，
厚壁的大分生孢子。一端稍弯曲，末端有帽样肥大，有
6-15
个分隔。小分生孢
子较少，长形，无柄侧生。可有球
拍状菌丝，破梳状菌丝，结节菌丝及大量厚壁
孢子等。
（
3
）菌种
鉴定：①菌落形态及色素，在
PDA
培养基上能产生黄色色素；
②特征性的厚壁、顶端膨大微弯曲，如戴帽的大分生孢子；③发外孢子型感染。
＊石膏样小孢子菌
（
1
）直接镜检：皮屑内见菌丝或成串的孢子，病发为发外型感
染，孢子较
大，排列成串。
（
2
）培养特性：在沙氏琼脂培养基上室温生长快，开始为白色菌丝，后
成
棕黄色粉未状菌落，凝结成片，菌落中心有隆起，外围有少数极短的沟纹，边缘
不整齐，背面红棕色。镜检：见多数较小，纺锤形，
4
～
6
个的大分生孢子，壁
厚<
/p>
1
～
3μm
，两
端园，壁有刺，菌丝较少，小分生孢子棒状无柄，有时可见球拍
状菌丝，螺旋，破梳状菌
丝及结节菌丝。