实验原理
-我的前半生结局是什么
luciferase assay
luciferase
assay
我们实验室通常称其小名
LUC
< br>实验，一般用于：
1
、检测目的基因启动子
的活性
2
、检测转录因子与目的基因启动子区
DNA
相互作用
3
、
目的基因转录后水平。
实验原理
：自
然界中广泛分布着生物发光有机体，其中包括细菌、真菌、鱼、昆虫等。最
广为人知就是
萤火虫。
在这些生物发光有机体中催化生物发光反应的各种酶都称之为荧光素
酶
（
Luciferases
）
，
底物则命名为荧光素
（
Luciferin
）
。
在有氧情况下，
luciferase
催化
luciferin
反应可以用一下反应式表示：
luciferase
Luciferin+ATP+O
2
——
>
Oxyl
uciferin+AMP+Ppi+CO
2
+Light
Mg
2+
该反应中会产生一种黄绿色闪光（发射峰
560
nm
），可用
spectrafluor plus
仪器检测（该
仪器在公共实验室那边）
。
当底物过量时，
发光量的总值与样品的荧光酶活性成正比，
因此，
可对荧光素酶报告基因的转录进行间接估计。
荧光素酶易被蛋白酶降解，
在转染的哺乳动物
细胞中的半衰期约
为
3
小时。荧光素酶报告系统为启动子活性的检测提供了一个
敏感、快
速、非放射性的检测方法。
MTT
原理
MTT
全称为
3-(4,5)-dimethylthiahi
azo (-z-y1)-3,5-di-
phenytetrazoliumrom
ide
，汉语化学名为
3-(4
，<
/p>
5-
二甲基噻唑
-2)-2
，
5-
二苯基四氮唑
溴盐，
商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。
MTT
比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为
活细胞线粒体中的
琥珀
酸脱氢酶
能使外源性
MTT
还原为
水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒
（
Formazan
）
并沉积在细胞
中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（
DMSO
）
能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪
在
490nm
波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，
MTT
结晶形成的量与细胞数成正比。<
/p>
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、
大规
模的抗肿瘤药物筛选、
细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、
经济。
缺点：由于
MTT
经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。这不仅
使工作量增加，
也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲瓒的有机溶剂
对实验者
也有损害。